OE-PCR法扩增获得犬瘟热病毒缺失疏水区的融合蛋白基因片段
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE（2005）
摘要
根据犬瘟热病毒(CDV)Onderstepoort株的核苷酸序列,设计合成引物,通过RT-PCR,从CDVOnderstepoort 株RNA中扩增出2197 bp的CDV全长融合蛋白(F)基因.将其与pGEM-T easy载体连接,通过软件分析其序列中的疏水区后,以pGEM-T/F为模板,PCR扩增出约254 bp和1017 bp的F蛋白疏水区外编码序列.以2个扩增产物为模板,以OE-PCR(overlap extension-PCR)扩增出约1271bp的缺失疏水区的F基因(dF),测序结果表明,dF的序列除在疏水区以4个甘氨酸序列替代外,其余部分与F基因的同源性为99.2%.这表明,OE-PCR扩增法已成功地使CDV F基因疏水区缺失.
更多关键词
canine distemper virus,fusion proteins,hydrophobic domains,oe-pcr
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