鹿结核分枝杆菌流行株Rv3874-Rv3875融合基因的克隆及原核表达
Journal of Economic Animal（2014）
Abstract
以吉林农业大学经济动物疾病实验室分离并保存的鹿结核分枝杆菌流行株为模板,利用重叠延伸剪接技术(Splicing by overlap extension,SOE)设计引物,克隆Rv3874-Rv3875融合基因,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3874-75,在大肠杆菌BL21 (DE3)中经IPTG诱导表达,并对目的蛋白进行纯化,表达产物通过SDS-PAGE和Western blot进行分析.结果表明:测序后融合基因Rv3874-Rv3875的序列与GenBank中序列的符合率为100％,重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3874-75在大肠杆菌中成功诱导表达,获得可溶性表达的融合蛋白,经SDS-PAGE分析该蛋白的相对分子质量约49 ku,经Western blot鉴定纯化好的融合蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应,具有良好的反应原性.
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