猪星状病毒4型SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立
Acta Veterinaria Et Zootechnica Sinica（2020）
Abstract
为建立一种快速检测猪星状病毒4型(PAstV4)的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,根据已知的猪星状病毒4型序列的ORF1a基因设计了特异性引物,并将扩增片段克隆到pMD19-T载体上;将构建的重组质粒作为标准品建立SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,并对建立方法的灵敏性、特异性及重复性进行验证.结果 显示,建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法最低检测量为50.3拷贝·μL-1,其灵敏度是普通PCR的100倍;与CSFV、PRRSV、PRV、PEDV、PDCoV无交叉反应,特异性较好;建立的标准曲线呈良好的线性关系,相关系数R2 =1.00.应用该方法检测了2018-2019年收集的43份临床样品,阳性率为18.6％.本研究为猪星状病毒4型的临床检测建立了一种快速、灵敏、特异性强的方法.
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