VEGF对体外培养绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的影响

本研究旨在探讨陕北白绒山羊毛囊外根鞘细胞的培养和VEGF对次级毛囊外根鞘细胞增殖、分化及细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、角蛋白10(K10)和成纤维细胞生长因子5(FGF5)mRNA表达量的影响.采集绒山羊体侧部皮肤,并利用消化等方法分离次级毛囊外根鞘细胞,置于37 ℃、5％CO2、饱和湿度条件下培养;选用第5代次级毛囊外根鞘细胞,添加不同质量浓度血管内皮生长因子(VEGF),分别处理24 、48 h,噻唑兰比色法(MTT)检测细胞活力,EdU核酸标记技术检测细胞增殖;实时荧光定量 PCR技术检测 PCNA 、K10 、FGF5 mRNA的表达情况.结果显示:1)成功培养出次级毛囊外根鞘细胞,CK17和CK15细胞免疫组化呈阳性.2)VEGF可以促进绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的增殖.相同浓度 VEGF处理48 h组的细胞活力极显著高于处理24 h组(P＜0.01);在48 h 处理组中,100 ng · mL －1组的细胞活力极显著高于对照组、1 ng · mL －1组、10 ng · mL －1组(P＜0.01),并显著高于50 ng· mL －1组(P＜ 0.05),50 ng · mL －1组的细胞活力显著高于对照组(P＜ 0.05);100 ng·mL －1组和50 ng · mL －1组增殖细胞比例均极显著高于对照组、1 ng · mL －1组、10 ng· mL －1组(P＜0.01),100 ng·mL －1组显著高于50 ng·mL －1组(P＜0.05).3)PCNA 、K10 、FGF5 mRNA在次级毛囊外根鞘细胞中均有表达.在VEGF处理48 h时,PCNA mRNA的表达量100 ng·mL －1组最高,极显著高于对照组(P＜0.01),显著高于10 ng·mL －1组(P＜0.05); K10 mRNA的表达量对照组最高,极显著高于10 ng· mL －1组与100 ng·mL －1组(P＜0.01);FGF5 mRNA的表达量对照组最高,极显著高于100 ng·mL －1组(P＜0.01).综上表明,本研究成功分离培养了陕北白绒山羊次级毛囊外根鞘细胞;VEGF能够促进次级毛囊外根鞘细胞的增殖,抑制细胞的分化;VEGF可能通过抑制次级毛囊外根鞘细胞中 FGF5基因的表达而促进毛囊生长.