酿酒酵母β-葡聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1表达的影响

为了探索β-葡聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞(ruminal epithelial cells,RECs)β-防御素-1(sheep β-defensin-1,SBD-1)表达的影响.本研究首先建立绵羊RECs培养体系作为体外试验模型,用不同浓度(0、5、10、20、50和100 μg·mL-1)的β-葡聚糖刺激RECs 8 h后,利用qPCR和ELISA方法检测RECs中SBD-1的表达变化,选出诱导SBD-1表达最高的β-葡聚糖浓度.然后用β-葡聚糖的最佳刺激浓度对RECs分别刺激0、2、4、8、12和24h,同样利用qPCR和ELISA方法对RECs SBD-1的表达变化进行检测,从而筛选出诱导SBD-1表达最高的刺激时间.qPCR和ELISA结果显示,β-葡聚糖(5～100 μg·mL-1)刺激RECs 8 h后,SBD-lmRNA和蛋白的表达随着β-葡聚糖浓度的升高均呈现先升高后降低趋势,且当β-葡聚糖浓度为10 μg·mL-1时SBD-1mRNA和蛋白的表达量极显著高于对照组(P＜0.01).当用10 μg·mL-1的β-葡聚糖刺激RECs 0～24 h后,qPCR结果显示,10 μg·mL-1的B-葡聚糖刺激RECs 2 h时SBD-1 mRNA的表达量最高(P＜0.01),之后呈下降趋势,而ELISA结果显示,在β-葡聚糖浓度为10 μg·mL-1刺激RECs 4 h后SBD-1蛋白分泌水平达到最高(P＜0.01).MTT测定结果显示,100 μg·mL-1 β-葡聚糖会对绵羊RECs活力产生显著的影响(P＜0.05).本研究结果表明,β-葡聚糖能够提高绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1的表达,且用浓度为10 μg·mL-1的β-葡聚糖分别刺激RECs 2和4h后SBD-1的mRNA和蛋白表达达到最高.