牦牛RGS1基因克隆及其在发情周期卵巢中的表达

本研究旨在阐明牦牛RGS1基因的表达特性及其在牦牛发情周期中卵巢组织的表达.通过采集不同发情周期的牦牛卵巢及肌肉、脾、心、肾、胃、小肠、小脑、肝和肺组织,以GenBank上已发布的黄牛RGS1基因序列设计引物,利用RT-PCR方法扩增克隆牦牛RGS1基因及检测其在牦牛各组织中的表达谱,并使用相关生物信息学软件分析RGS1基因的结构和功能.采用实时荧光定量PCR法检测RGS1基因在牦牛发情周期卵巢中mRNA的表达水平.结果表明,本试验克隆得到牦牛RGS1基因718 bp的cDNA序列.同源性与进化树分析表明,牦牛RGS1核苷酸序列与黄牛、野牦牛等大多数哺乳动物的遗传距离较近,其在进化进程中相对较保守.牦牛RGS1基因CDS区为591 bp,编码196个氨基酸残基,相对分子质量为22.48 ku,不含跨膜结构和信号肽,为亲水性蛋白和非分泌蛋白.蛋白二级结构和三级结构以a-螺旋和自由卷曲结构为主.RGS1基因在所选牦牛组织样品中均有表达,其中在小肠、小脑、心和胃中表达量最高.荧光定量PCR结果显示,牦牛黄体期卵巢中RGS1 mRNA的表达量极显著高于卵泡期和红体期(P＜0.01),卵泡期中RGS1 mRNA表达水平高于红体期,但差异不显著(P＞0.05).本研究成功克隆了RGS1基因及其在牦牛卵巢3个时期中mRNA的差异性,表明该基因参与发情周期卵巢的内分泌活动调控.