多头带绦虫dUTPase基因的原核表达、组织定位及酶学活性分析

探讨多头带绦虫脱氧尿苷三磷酸酶(Tm-dUTPase)的基因特征,并初步分析Tm-dUTPase的酶学活性.通过原核表达,得到重组Tm-dUTPase蛋白,并对其进行Western blot分析、免疫荧光定位及酶学活性分析.序列分析结果显示,Tm-dUTPase基因ORF框为447 bp,编码148个氨基酸,预测的蛋白质分子大小为16.39 ku,等电点为6.263;与猪囊尾蚴和豆状囊尾蚴dUTPase基因的氨基酸序列相似性分别为97％和91％.原核表达的Tm-dUTPase为可溶性蛋白,纯化后的蛋白质质量浓度为0.907 mg·mL-1,Western blot分析显示,该蛋白质能够被山羊脑多头蚴阳性血清所识别,具有较强的反应原性.免疫荧光定位显示Tm-dUTPase主要分布于多头带绦虫成虫的体内实质区,同时广泛分布于多头带绦虫幼虫(脑多头蚴)的头节和包囊囊壁外层.酶学活性试验测得重组Tm-dUTPase的比活力为986.29 U·mg-1,EDTA能够抑制Tm-dUTPase活性,而金属离子Mg2+、Zn2+、Cu2+能够增强Tm-dUTPase活性.上述结果为进一步研究Tm-dUTPase基因的生物学功能奠定了基础.