梅花鹿-牛异种体细胞核移植操作方法的研究

本研究旨在对梅花鹿牛异种体细胞核移植(Interspecies somatic cell nuclear transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程.以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,牛MⅡ期卵母细胞为受体,分别采用盲吸法、挤压法和脱羰秋水仙碱(Demecoline,DEME)化学辅助的方法去核,带下注射(Perivitelline microinj ection,PM)、Pizeo破膜细胞胞质内注射(Break-membrane-cell intracytoplasmic microinjection,BMCIM)和全细胞胞质内注射(Whole-cell intracytoplasmic microinjection,WCIM)的方法注核,带下注核的卵母细胞电融合后化学激活,其余方法注核后直接化学激活,重组胚用CR1 aa培养液体外培养.结果表明:(1)DEME辅助法去核率最高,挤压法最低,3种去核方法的去核率差异显著(P＜0.05),去核时间差异不显著(P＞0.05);(2)PM组和WCIM组注核成功率分别为100.0％和94.8％,注核时间分别为31.0和35.1s,显著低于BMCIM法(P＜0.05),但是注核成功率显著高于BMCIM法(P＜0.05),而且两者差异不显著(P＞0.05);(3)BMCIM组和WCIM组的激活率均显著高于PM组(P＜0.05),其中一步法的BMCIM组最高,一步法和两步法在激活率、卵裂率和囊胚率方面均无显著差异(P＞0.05).结果提示:DEME辅助去核、Pizeo辅助破膜胞质内注射的一步法显微操作可有效用于梅花鹿牛的异种体细胞核移植的研究.