检测牛IFN-γ双抗体夹心ELISA的建立及在牛结核病诊断上的初步应用

本研究旨在建立牛IFN-γ体外释放法,为牛结核病的免疫学诊断提供一种快速、有效的新检测技术.分别以获得的牛IFNγ单克隆抗体Bo-mAb1作为捕获抗体,以Bo-mAb2H作为检测抗体,建立了基于双抗体夹心ELISA(DAS ELISA)的牛IFN-γ体外释放法.该方法的最低检出限为3.12 ng·mL 1,可特异性检测出重组牛IFN-γ(Bac BoIFN-γ)及天然BoIFN-γ,而与猪、犬、鸡的天然IFN-γ无交叉反应.批内、批间变异系数小于5.11％.临床检测结果显示,与结核菌素皮内变态试验(TST)、进口BovigamTM试剂盒检测的符合率分别为88.7％和95.3％.结果表明,DAS-ELISA法具有良好的敏感性、特异性及精确度,可用于临床样品的检测,为监测牛结核病特别是其早期感染提供了强有力的检测技术手段.