鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白的真核表达及免疫原性分析

为真核表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的S1蛋白并鉴定其免疫原性,构建了IBV广西优势血清型代表株GX-YL5 S1蛋白基因的重组表达载体pFastBacTM/HBM-TOPO-S1,转化DH10Bac细胞进而拯救出重组杆状病毒;经间接免疫荧光(IFA)和Western blot鉴定并大量表达;纯化后免疫新西兰大白兔制备兔抗血清,应用IFA和Western blot对该重组蛋白的反应原性进行鉴定,并应用气管环(TOC)中和试验分析其免疫原性.IFA显示重组杆状病毒感染后72 h细胞出现特异性荧光;Western blot显示重组蛋白与抗His标签单克隆抗体以及IBV特异性抗体均能结合,且反应性良好,特异性强;中和试验显示制备的血清对IBV的中和滴度为1:512.表明该重组S1蛋白具有较好的免疫原性,为IBV S1蛋白的生物学功能、基因工程亚单位疫苗等研究奠定了基础.