PEDV、TGEV和PoRV三重PCR检测方法的建立及初步应用

为建立一种快速、敏感的猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)三重PCR检测方法,根据GenBank登录的PEDV S基因、TGEV M基因和PoRV VP7基因参考序列,设计3对特异性引物,以克隆的质粒为模板,进行反应条件的优化以及特异性、敏感性试验.结果采用所建立的方法能够扩增出PEDV、TGEV和PoRV特异性片段,且不能检出PCV2、CSFV、PRRSV;对PEDV、TGEV和PoRV质粒模板的最低检测量分别为1×102拷贝/μL、1×100拷贝μL、1×103拷贝/μL;对102份临床病料进行检测,结果PEDV、TGEV和PoRV的检出率分别为37.25％、1.96％和6.86％,与单项PCR检测结果进行比较,符合率均为100％.结果表明,所建立的三重PCR检测方法可为猪病毒性腹泻病的快速诊断及流行病学调查提供技术支持.