新型鸭细小病毒VP3基因克隆与原核表达
Progress in Veterinary Medicine（2018）
Abstract
应用PCR方法扩增新型鸭细小病毒(NDPV )VP3基因,将其克隆至原核表达载体pQE1中,获得重组质粒pQE1-VP3 .重组质粒pQE1-VP3经优化诱导表达后,通过SDS-PAGE对表达产物进行分析并利用His标签抗体对表达的蛋白进行Western blot鉴定.结果表明,NDPV VP3蛋白在25℃、IPTG浓度为1 .0 mmol/L经诱导5 h ,可获得最大诱导表达量,表达蛋白的分子质量约为60 ku ,主要以不溶性包涵体形式存在.纯化复性后,可获得浓度为5 .165 mg/mL 及纯度为97% 的VP3蛋白.获得的重组菌pQE1-VP3以及高纯度的VP3蛋白,为进一步研究NDPV检测方法和新型疫苗奠定了基础.
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