蛋白磷酸酶2A 的 Cβ亚基在胚胎成纤维细胞凋亡过程中的作用

为探究蛋白磷酸酶2A 的 Cβ亚基在胚胎成纤维细胞(MEFs)凋亡过程中的作用,用 Cβ＋/－的杂合子雄鼠与雌鼠1∶2配对,取胚胎期12．5 d(E12．5)的胚胎制备 MEFs,用 PCR、RT-PCR 和 Western blot方法进行基因型鉴定。同时对 P3代 MEFs 利用流式分选技术检测其细胞凋亡和细胞周期的变化,并采用Western blot 检测抗凋亡蛋白 Bcl-2的表达。结果采用胰酶消化方法成功获得了 MEFs,DNA、RNA 和蛋白水平鉴定显示获得了3对3的野生型和 Cβ基因敲除 MEFs。流式分选发现 Cβ基因敲除 MEFs 和野生型之间细胞分裂期前期(M1期)细胞分别为53．95％±2．81和46．94％±4．17,细胞分裂期后期(M2期)细胞分别为21．14％±2．53和29．83％±3．25。但 Bcl-2的蛋白表达量和 mRNA 表达量没有显著差异。结果表明,虽然蛋白磷酸酶2A 的 Cβ亚基的缺失并不会导致小鼠胚胎死亡,但 Cβ亚基的缺失会轻微影响胚胎成纤维细胞(MEFs)的细胞周期。