蛋白磷酸酶2A 催化亚基α在小鼠胚胎成纤维细胞迁移中的作用研究

利用体外基因敲除技术检测小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblasts，MEFs）周期和迁移能力的变化，探究蛋白磷酸酶2A 的 Cα亚基在 MEFs 细胞迁移过程中的作用。用 Cαfl／fl的纯合子雄鼠与雌鼠1∶2配对，取 E12．5 d 的胚胎制作小鼠胚胎成纤维细胞。利用表达 Cre 重组酶（Ad-Cre-EGFP）以及GFP 荧光蛋白（Ad-EGFP）的腺病毒载体，对 P3代 MEFs 进行感染，分别用 PCR，RT-PCR 和 Western blot方法进行基因型鉴定。同时利用流式分选技术检测感染后 MEFs 的细胞周期的变化，利用细胞划痕试验检测了其细胞迁移能力的变化。结果显示，胰酶消化的方法成功获得了小鼠胚胎成纤维细胞，DNA，RNA 和蛋白水平的鉴定获得了3对3的野生型和基因敲除 MEFs。流式分选发现 Ad-Cre 处理的 MEFs 与 Ad-EG-FP 处理的 MEFs 相比，处于 G2期的细胞比例为30．8％±2．57％，高于 Ad-EGFP MEFs 的23．9％±2．46％，并且细胞碎片的比例也远高于后者。划痕试验表明，Cα亚基缺失后细胞迁移能力下降，12 h 就显著低于对照组。结果表明，腺病毒携带的 Cre 重组酶能够在体外有效地敲除掉 MEFs 中的蛋白磷酸酶2A 的Cα亚基，PP2A Cα亚基的缺失会导致 MEFs 细胞周期倾向于阻滞在 G2期，并会降低细胞迁移的能力。