蓝舌病毒NS2蛋白的抗体制备及鉴定
Chinese Journal of Veterinary Parasitology（2019）
摘要
本研究参考GenBank中蓝舌病毒16型(Bluetongue virus serotype 16,BTV-16)标准株RSAvvvv的序列,人工合成编码BTV-16 NS2蛋白的S8基因,将其亚克隆至原核表达载体pPRoEx-HTb中,构建重组表达质粒pPro-NS2,并转化大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达,并进行可溶性分析.SDS-PAGE结果显示,表达的rNS2蛋白主要以包涵体的形式存在于菌体中.利用组氨酸标签纯化树脂获得了高纯度的NS2蛋白,免疫新西兰白兔制备抗NS2蛋白的多克隆抗体.Western blot结果显示,制备的抗NS2蛋白多克隆抗体不仅可与重组表达的rNS2蛋白反应,而且可与BTV感染细胞后的天然NS2蛋白反应.间接免疫荧光结果显示,该抗体也可与BTV感染C6/36细胞中的天然NS2蛋白反应,且发现NS2大量分布于C6/36细胞的胞质中.本研究所制备的NS2蛋白的多克隆抗体具有很好的反应性和特异性,为进一步研究NS2蛋白的功能奠定了基础.
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