猪圆环病毒2型Cap蛋白表达及免疫原性鉴定

以猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2) WH株基因组DNA为模板，扩增ORF2截短基因，经BamH I/Not I 双酶切处理后与经相同酶切处理的 pET32a (+)原核表达载体连接，获得重组质粒 pET32a-Cap2。将重组质粒转化至 BL21（DE3），经IPTG诱导，对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。纯化的重组蛋白免疫小鼠，并对获得的血清进行间接 ELISA检测和中和活性测定。SDS-PAGE分析表明，ORF2截短基因在大肠杆菌中得到表达，蛋白分子质量大小为40 kDa，重组PCV2 Cap蛋白主要以上清的形式存在。Western blot证实重组蛋白能够识别抗PCV2阳性血清。经间接ELISA检测，鼠抗PCV2 Cap血清抗体效价能达到1：25600，间接免疫荧光检测分析表明，鼠抗PCV2 Cap血清能特异性识别PCV2感染细胞中的Cap蛋白。病毒血清中和实验证实，抗PCV2 Cap血清抗体具有中和病毒的活性，中和效价为1：36。猪圆环病毒2型 Cap 蛋白的表达，为进一步研究该蛋白的功能及Cap蛋白亚单位疫苗和检测试剂盒的制备奠定了基础。