过表达UGPase基因和BCSP31基因的重组流产布氏杆菌的构建与鉴定

Jia-ming LIANG,Jing QIAN,Zhao-yang BU,Xu-long LANG,Li WANG,Xiu-ran WANG,Yan-ling YANG,Xiao-xu WANG,Hai-long QU,Xing-long WANG

Chinese Veterinary Science（2019）

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摘要

为提高流产布氏杆菌S19疫苗株的免疫保护效果,分别扩增流产布氏杆菌UGPase基因和BCSP31基因,将其插入含有双启动子pR/pL序列的广宿主穿梭质粒pBBR1MCS-PT中,电转至流产布氏杆菌S19感受态细胞并经抗性基因筛选,采用PCR法对重组菌株的遗传稳定性进行检测,利用蛋白分析手段对目的基因的表达情况进行分析.PCR检测结果显示,构建的重组流产布氏杆菌S19-UGPase株和S19-BCSP31株的遗传性状稳定.SDS-PAGE与Western-blot结果显示,在33和31ku处可见明显条带,且与His标签抗体的反应位置一致,表明目的蛋白获得正确表达.结果表明,构建的过表达重组流产布氏杆菌S19-UGPase株和S19-BCSP31株能够稳定表达目的基因,为下一步开展S19-UGPase株和S19-BCSP31株免疫效果的评价奠定了基础.

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