基于serpin重组蛋白的豆状囊尾蚴病间接ELISA诊断方法的初步建立

为检测兔豆状囊尾蚴(Cysticercus pisiformis感染,利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)扩增豆状囊尾蚴serpin基因,并对其开放阅读框(ORF)及编码的氨基酸序列进行生物信息学分析.构建pET-30a(+)-Cpserpin重组表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.以纯化的重组蛋白(rCpserpin)为包被抗原,优化反应条件,建立检测兔豆状囊尾蚴病血清抗体的间接ELISA方法.结果表明,Cpserpin基因的完整ORF长为1 149 bp,含有serpin家族保守基序(DEEGAE)、serpin标签序列(FKVDHPFIFFI)以及serpin特有的反应中心环结构域(RCL);rCpserpin主要以包涵体形式表达,且能被家兔豆状囊尾蚴阳性血清所识别.所建立的间接ELISA的最佳反应条件包括:rCpserpin包被质量浓度为2μg/mL,待检血清和酶标二抗的稀释度分别为1:100和1:2 500,包被液和封闭液分别为pH9.6碳酸盐缓冲液和10 g/L牛血清白蛋白.利用上述条件检测60份家兔豆状囊尾蚴阳性血清和108份阴性血清,证实该方法的临界值为0.368,敏感性和特异性分别为96.7％和93.5％.结果表明,基于Cpserpin重组蛋白的间接ELISA方法可用于家兔豆状囊尾蚴病的血清学诊断.