副猪嗜血杆菌LAMP检测方法的建立
Chinese Veterinary Science（2018）
摘要
为建立快速鉴别检测副猪嗜血杆菌的方法,根据GenBank中公布的副猪嗜血杆菌16SrRNA基因设计环介导等温扩增(LAMP)引物,利用Loopamp Realtime Turbidimeter LA-320c仪对反应体系和条件进行优化,建立了检测副猪嗜血杆菌的LAMP方法.结果显示,该方法可在65 ℃下反应15 min实现肉眼可视化直接判定结果.该方法仅对副猪嗜血杆菌有特异扩增,对胸膜肺炎放线杆菌、肠炎沙门菌等其他10种相关病原菌均无特异性扩增,表明特异性好,且具有较好的重复性及稳定性.其检测的灵敏度为0.175 fg/ L,高于PCR方法1×104倍.对94份临床发病猪的鼻拭子样品平行检测结果显示,LAMP方法与NY/ T 2417—2013标准中的方法间的符合率为96.8％.本方法为基层和口岸快速鉴别诊断副猪嗜血杆菌病提供了新的技术手段.
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