蓝舌病毒VP5蛋白抗体的制备及鉴定
Chinese Veterinary Science（2018）
Abstract
本研究参考GenBank 中蓝舌病毒16型(BTV-16)标准株RSAvvvv 的序列,首先人工合成编码BTV-16 VP5蛋白的S6全长基因,并克隆于pUC-57载体.设计表达引物,利用PCR方法扩增N末端缺少编码第1～41位氨基酸的截短基因VP5Δ41aa,将其亚克隆到表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-VP5Δ41aa.将表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示,重组蛋白VP5Δ41aa 在大肠杆菌中大量表达.利用组氨酸标签纯化树脂获得了高纯度的VP5Δ41aa 蛋白,用其3次免疫新西兰大白兔制备相应的抗血清,Western-blot 检测显示,抗血清不仅可与重组表达的VP5Δ41aa蛋白反应,而且可与BTV感染细胞中的VP5蛋白反应.免疫荧光试验表明,该抗体也可与BTV感染C6/ 36细胞中具有天然构象的VP5蛋白反应.上述结果表明,本试验制备的VP5抗体将为深入研究VP5蛋白的生物学功能奠定基础.
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