绵羊肺炎支原体TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用
Chinese Veterinary Science（2018）
摘要
本研究旨在建立一种灵敏性高、特异性强的检测绵羊肺炎支原体的TaqMan实时荧光定量PCR方法.根据GenBank上已发表的绵羊肺炎支原体HSP70基因序列设计引物和探针,构建标准阳性质粒,建立实时荧光定量PCR方法.试验结果显示,该方法标准曲线的线性关系良好,标准曲线的相关系数R2=1.000,斜率S=-3.334,扩增效率E=99.5％;敏感性高,可以检测出的最低样品浓度为1×101copies/μL,是普通PCR的100倍;特异性强,能有效区分巴氏杆菌等9种病原;重复性好,组内、组间的Ct值变异系数均小于2％.运用本试验建立的实时荧光定量PCR方法可简便、准确地鉴定绵羊肺炎支原体.
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