迟缓爱德华氏菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种快速、敏感检测迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的方法,本研究根据E.Tarda的促旋酶B亚单位基因(gyrB)保守区设计特异性引物和TaqMan探针,并优化检测反应条件,建立了E.tarda的TaqMan实时荧光PCR检测方法.结果显示,该方法仅对E.tarda的靶基因扩增呈阳性,而对创伤孤菌、福氏志贺氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、单核增生性李斯特菌、肠炎沙门菌、溶藻弧菌、阪崎肠杆菌、大肠杆菌○157、温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、霍乱孤菌等相关致病菌检测结果均为阴性,特异性良好;该方法对E.tarda检测的灵敏度为20 CFU/mL;重复性试验表明,该方法的变异系数在0.95％～2.44％之间,具有良好的重复性.本研究结果表明,建立的E.tarda TaqMan实时荧光PCR方法灵敏、快速、特异性强、重复性好,适用于E.tarda检疫、疫情监测及流行病学调查.