日本血吸虫胰岛素样多肽的真核表达及其多克隆抗体的制备

为克隆和表达日本血吸虫胰岛素样多肽基因(Sjilp)并制备特异性多克隆抗体,根据基因组注释信息,设计特异性引物,利用RT-PCR技术从日本血吸虫成虫mRNA中成功扩增出长度为588 bp的特异性cDNA序列,其CDS序列长393 bp.基于毕赤酵母密码子偏好性,对Sjilp基因密码子进行优化,构建pPIC9K-Sjilp重组表达载体,并在毕赤酵母GS115中进行诱导表达.SDS-PAGE与Western-blot检测结果显示,重组蛋白Sj-ILP获得高效表达,其大小约为15 ku,与预期结果一致.利用合成肽技术,设计并合成得到2条特异性的肽段,偶联KLH,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,间接ELISA检测其效价达到1∶51 200,Western-blot鉴定表明这2条特异性多肽具有良好的免疫原性.本试验为后续验证Sj-ILP与其结合蛋白的功能奠定了良好的基础.