弓形虫Ⅰ型蛋白磷酸酶基因的原核表达及蛋白的定位研究

为表达刚地弓形虫I型蛋白磷酸酶(Toxoplasma gondii protein phosphatase 1,TgPP1)基因、确定TgPP1在弓形虫速殖子上的定位,将全基因合成的TgPP1基因克隆到表达栽体pET-30a(+)中,构建重组栽体pET30a-TgPP1,转化入大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞中,经JPTG诱导,利用SDS-PAGE和Western-blot检测重组蛋白表达情况及其免疫学活性.通过亲和层析获得TgPP1重组蛋白,制备抗血清,采用间接ELISA检测血清效价、免疫荧光法检测TgPP1蛋白在弓形虫中的定位.结果显示,成功构建了重组表达载体pET30a-TgPP1并实现了在大肠杆菌中的表达,表达产物的分子质量约为36 ku.Western-blot检测结果显示,重组蛋白能与弓形虫感染小鼠阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性.免疫荧光检测结果显示,TgPP1主要定位于弓形虫速殖子顶端.上述结果为进一步研究TgPP1在弓形虫入侵和繁殖过程中的作用及其机制打下了基础.