施马伦贝格病毒核衣壳蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中的表达与纯化

为表达与纯化具有天然构象的施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳(N)蛋白,在SBV-N蛋白编码基因的N端引入谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签编码序列,将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac 1中构建重组供体质粒pFastBac-GST-SBV-N;经测序鉴定后,将pFastBac-GST-SBV-N转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,使其与DH10Bac内含有的杆状病毒穿梭载体(杆粒)进行位点特异性转座,形成重组杆粒Bacmid-GST-SBV-N;抽提重组杆粒,转染Sf9昆虫细胞制备表达GST-SBV-N融合蛋白的重组杆状病毒rBac-GST-SBV-N;利用间接免疫荧光试验检测rBac-GST-SBV-N感染的Sf9细胞与SBV抗血清的反应情况.结果表明,rBac-GST-SBV-N感染的Sf9细胞能够与SBV抗血清发生特异性反应.利用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B纯化Sf9细胞内表达的GST-SBV-N融合蛋白,借助PreScission蛋白酶切除GST标签后,对重组SBV-N蛋白进行Western-blot鉴定和间接ELISA分析.结果显示,在分子质量约为26 ku处出现一条特异性条带,其大小与SBV-N蛋白相符;该蛋白与抗SBV-N蛋白单克隆抗体2C8和SBV抗血清均能发生特异性反应,说明该蛋白具有良好的反应原性.SBV-N真核表达蛋白的成功制备和纯化,为施马伦贝格病血清学检测方法的建立提供了诊断抗原.