山羊副流感病毒3型HN蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为制备山羊副流感病毒3型(caprine parainfluenza virus type 3,CPIV3) HN蛋白单克隆抗体,将CPIV3 HN基因1081～1725 bp片段(编码361～574 aa)克隆入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-32a(+)-HN361-574 aa,转化至大肠杆菌Rosetta (BL21)感受态细胞并进行诱导表达,分别用SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组表达蛋白.结果表明,CPIV3 HN蛋白361～574 aa片段被正确表达.用两段截短的HN蛋白混合免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾与骨髓瘤细胞SP2/0融合制备单克隆抗体,分别用间接ELISA、Western-blot和IFA筛选和鉴定融合细胞上清.通过筛选获得3株杂交瘤细胞,分别命名为3F1、4A7、4H4,进一步研究表明,这3种单克隆抗体至少识别2个不同的抗原表位.本研究为CPIV3病原学检测方法的建立以及病理学诊断奠定了重要的基础.