呋喃它酮代谢物直接竞争化学发光检测方法的建立

将呋喃它酮代谢物(AMOZ)与对醛基苯甲酸反应生成CPAMOZ,采用碳二亚胺法将CPAMOZ和HRP偶联得到酶标物CPAMOZ-HRP,在该酶标物和CPAMOZ单克隆抗体的基础上,建立AMOZ的直接竞争化学发光(CLIA)检测方法.结果显示,CPAMOZ-HRP经紫外扫描鉴定偶联成功;以单克隆抗体稀释度1∶8 000为最佳包被浓度,CPAMOZ-HRP稀释浓度1∶64 000为最佳工作浓度建立CLIA方法,其标准曲线呈线性,线性范围0.062 5～8 ng/mL,回归方程为y=-0.397x+0.286(R2=0.992),IC50为0.289 ng/mL;AMOZ单克隆抗体能特异性识别NPAMOZ (AMOZ的对硝基苯甲醛的衍生物),除AMOZ外与其他参试的化学品或药物无交叉反应;样品最低检出限为0.059 6 μg/kg;样品添加回收率在85％～91.93％之间,检测值的变异系数≤10％;实际样品检测结果与进口试剂盒检测结果呈线性相关(y=0.935x+0.556,R2=0.997),表明本试验建立的方法可靠性等同于进口试剂盒,可满足AMOZ实际检测的需要.