猪带绦虫HSP70-4的真核表达及其抗血清的制备

为了研究猪带绦虫(Taenia solium)热休克蛋白70-4 (TsHSP70-4)基因序列的特征及其真核表达蛋白的抗原性,参考GeneDB中猪带绦虫基因组注释信息,设计特异性引物,RT-PCR扩增TsHSP70-4ORF序列.根据毕赤酵母密码子偏好性,对TsHSP70-4基因密码子进行优化,连接载体pPIC9K,在毕赤酵母中进行诱导表达,通过Western-blot及质谱测序进行蛋白鉴定.将纯化后的TsHSP70-4表达蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗血清.结果显示,成功克隆出大小为1 953 bp的TsHSP70-4ORF序列.在毕赤酵母中进行了高效表达,获得大小约为95 ku的重组蛋白.Western-blot检测和质谱鉴定表明,获得的重组蛋白即为TsHSP70-4.免疫新西兰大白兔,制备出效价高达1∶409 600的抗血清.该研究为猪囊尾蚴病新疫苗的研制提供了依据.