小反刍兽疫病毒H基因过表达对病毒增殖的影响
Chinese Veterinary Science（2016）
摘要
为研究小反刍兽疫病毒H基因过表达后对病毒增殖的影响,根据GenBank中小反刍兽疫病毒疫苗株Nigeria 75/1H基因序列,设计1对引物扩增H基因全长编码区序列,并将其连接至真核表达载体pEGFP-C3上,经鉴定正确后转染CHS-20细胞,并通过RT-PCR、荧光观察及Western-blot分别在mRNA和蛋白水平检测H基因的表达.结果表明,H基因在CHS-20细胞内得到了表达.将pEGFP-C3-PPRV H重组质粒、空载体pEGFP-C3转染CHS-20细胞,待H基因表达后,接种PPRV Nigeria 75/1,病毒增殖一定时间后,以β-actin作为内参基因,采用相对荧光定量RT-PCR法研究病毒增殖量的变化.结果表明,相对于未转染及转染空载体pEGFP-C3的细胞,转染pEGFP-C3-PPRVH重组质粒的细胞PPRV增殖量得到了提高,且差异显著(P＜0.05),这说明在CHS-20细胞中过表达PPRVH基因能促进PPRV增殖.
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