鸭白细胞介素-2基因的克隆表达和单克隆抗体的制备
Chinese Veterinary Science（2013）
Abstract
为研制鸭IL-2单克隆抗体,运用RT-PCR技术从樱桃谷鸭脾淋巴细胞中扩增鸭IL-2基因,将其克隆至原核表达载体pCold TF DNA中,进行诱导表达.用纯化的IL-2重组蛋白免疫BALB/c小鼠,融合后筛选抗鸭IL-2的阳性杂交瘤细胞株.通过间接ELISA法测定腹水效价、Western-blot法检测其免疫反应性,并鉴定抗体的亚类.测序结果显示,去除信号肽后的鸭IL-2基因,其编码区全长为363 bp,编码120个氨基酸;SDS-PAGE检测结果表明,获得了可溶性的65 ku的IL-2融合蛋白;免疫小鼠后获得3株抗鸭IL-2的阳性杂交瘤细胞株,腹水效价均达到1∶512 000以上,为IgG2b亚类.Western-blot结果表明,制备的单克隆抗体具有良好的免疫反应性.上述结果表明,成功制备了抗鸭IL-2的单克隆抗体,为进一步建立鸭IL-2的检测方法奠定了基础.
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