樗蚕孵化酶基因的克隆与表达特征分析
Acta Sericologica Sinica（2018）
摘要
樗蚕(Philosamia cynthia cynthia)是重要的野蚕资源.为从分子水平研究樗蚕的孵化机制,以催青第9天的樗蚕卵为材料提取总RNA并反转录合成cDNA,根据鳞翅目昆虫孵化酶基因的保守序列设计简并引物,通过RACE-PCR获得樗蚕孵化酶基因全长cDNA,命名为PccHE(GenBank登录号:MH 119084).PccHE基因cDNA全长为964 bp,由5’-UTR、3’-UTR和885bp的ORF组成,编码294个氨基酸;PccHE蛋白序列合有孵化酶特征序列锌指结合基序和Met-转角基序;基于PccHE氨基酸序列与16种动物孵化酶同源氨基酸序列构建的系统进化分析树显示,樗蚕与蓖麻蚕之间的亲缘关系最近.半定量RT-PCR检测PccHE在樗蚕胚胎发育早期的表达维持在较低水平,催青第3天小幅度增加,第9天时表达水平开始大幅上升,至孵化前达到最高水平;PccHE在5龄3d幼虫中肠中高水平表达,并且在马氏管中也有表达,这是首次在昆虫马氏管中发现孵化酶基因的表达.上述结果表明,PccHE与樗蚕的胚胎发育和孵化密切相关,还可能参与幼虫期的食物消化、蛋白质代谢等生物学过程.
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