家蚕常用内参蛋白多克隆抗体的制备及应用比较分析
Acta Sericologica Sinica（2018）
摘要
内参基因是一种在所有组织和细胞中都表达的管家基因,常被用作基因和蛋白质功能研究中的参照.目前市场上商品化的内参抗体在家蚕中检测不稳定,制备高效、特异的可用于家蚕研究的内参抗体显得十分必要.对家蚕中常用的内参基因actin和tubulin进行克隆,构建其原核表达载体;通过原核表达和纯化,获得了纯度较高的融合蛋白;免疫新西兰大白兔后,成功制备了二者的多克隆抗体;酶联免疫吸附检测Actin抗体和Tubulin抗体的效价分别为1∶1000和1∶16000.Westernblot结果表明,制备的家蚕内参抗体不仅能特异结合家蚕蛋白,同时可有效检测其他昆虫及哺乳动物中的相应蛋白,且抗体制备简单,成本较低,从而增加了内参抗体的多样性和选择性,为后续家蚕蛋白的功能研究奠定了基础.
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