家蚕核型多角体病毒编码miR-364对DNA聚合酶基因表达的调控作用研究

MicroRNA (miRNA)在调控病毒与宿主相互作用方面起着重要作用.为了研究家蚕核型多角体病毒(BmNPV)编码的miRNA对其自身靶基因的调控作用,通过高通量测序得到BmNPV编码的一条miRNA--BmNPV-miR-364,利用在线靶基因预测程序RNAhybrid与RNA22预测BmNPV基因组中有6个基因可能是BmNPV-miR-364的靶基因.分别构建BmNPV-miR-364与6个侯选靶基因3'-UTR的表达载体,共转染BmN细胞后检测其双荧光素酶活性,结果表明BmNPV-miR-364对BmNPV DNA聚合酶(DNA polymerase)基因的抑制作用显著(P＜0.05),对其余5个靶基因的抑制作用不显著.进一步采用BmNPV-miR-364 mimic与BmNPV-miR-364 inhibitor分别进行过表达和缺失表达分析,显示BmNPV-miR-364 mimic能显著抑制DNA polymerase基因的表达,而BmNPV-miR-364 inhibitor能显著解除BmNPV-miR-364对DNA polymerase基因的抑制作用.将BmNPV-miR-364与DNA polymerase基因的表达载体共转染BmN细胞,qRT-PCR分析发现实验组细胞中病毒DNA polymer-ase基因的表达水平显著低于对照组.qRT-PCR检测家蚕经口接种BmNPV后24h内,血淋巴中BmNPV-miR-364和病毒DNA polymerase基因的表达量很低,但在24 h之后表达量急剧上升.研究结果提示:BmNPV编码的miR-364可以靶向抑制自身复制过程中的重要酶基因,调节DNA的复制.