牛源粪肠球菌esp基因的表达及生物信息学分析

为了研究粪肠球菌表面蛋白基因(esp)对奶牛乳房炎致病性的影响,应用PCR技术扩增了部分牛源粪肠球菌表面蛋白基因(esp),构建了原核表达载体pET-28a::esp,并在大肠埃希氏菌BL21中表达esp;利用生物信息学软件分析其编码氨基酸的基本理化性质.结果显示:实验成功构建了原核表达载体pET-28a::esp,并在大肠埃希氏菌BL21中得到了高效表达,选取的部分esp编码的蛋白分子质量大小为110ku左右,主要以可溶性形式存在;生物信息学分析得出选取的部分CDS长度为3795 bp,编码1207个氨基酸,其中含有108个潜在的磷酸化位点,存在抗原表位,跨膜结构可能存在区域为1~200位aa,不存在信号肽,有6个肽糖基化位点;预测其蛋白质二级空间结构以α-螺旋、无规则卷曲、β-折叠为主,而且比较发现esp在粪肠球菌中的无规则卷曲和β-折叠比在表皮葡萄球菌略多一些;esp编码的蛋白为酸性亲水性蛋白,等电点为9.67,脂肪系数为82.34,总平均亲水性为-0.713,不稳定指数为43.99,总共包括19799个原子,分子式为C6132H10027N1741O1848S51,说明esp是一种抗原指数较高的亲水性蛋白,在原核系统能高效表达.