首例兽用活疫苗中污染副流感病毒5型的检测

从某企业送检的猪伪狂犬活疫苗中检出疑似血凝性外源病毒污染,经病原学和分子生物学鉴定,证实该疫苗污染了PIV5,并对我国主要猪用活疫苗中污染PIV5情况进行了摸底检测.将样品经伪狂犬病毒特异性阳性血清中和后,接种Vero细胞连传5代,可出现细胞圆缩、聚集、颗粒增多等细胞病变.纯净性检测显示该分离株无细菌污染、支原体污染和外源病毒污染.将该分离毒株F10代培养物进行病毒含量和HA效价测定,分别为107.0 TCID50/mL和1:256.以PIV5单克隆抗体作为一抗进行IFA染色,可在感染细胞的胞浆中观察到典型的绿色荧光;采用针对P IV5的L基因设计特异性引物,经RT-PCR可扩增出277 bp特异性片段,经测序后与GenBank中已发表的8株PIV5序列进行同源性比较,同源性为93.1％～97.4％,其中与我国分离的来自小熊猫的PIV5 ZJQ-221株(登陆号:KF100034.1)同源关系最近,为97.4％;其次与犬源、猴源、牛源的PIV5同源性均在95.5％以上,与猪源的PIV5同源性为93.3％～95.9％,同源性均较高.基因序列系统进化树分析显示同样的结果.以上试验证明疫苗中污染的病毒为PIV5,并命名为PIV5/01株.针对国内猪用活疫苗中污染PIV5情况的初步摸底检测显示,PIV5污染率约为16.7％,提示应加强疫苗中污染P IV5的预防和控制.