家蝇幼虫双翅肽MdDpt I成熟肽基因的克隆与原核表达

对鸡沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库（ SSH）中筛选得到的家蝇双翅肽 I （ Musca domestica Diptericin I， MdDpt I）基因进行克隆、表达，并对表达产物的抑菌活性进行初步研究。以沙门氏菌诱导家蝇幼虫cDNA为模板，采用cDNA末端快速扩增技术（ RACE），对MdDpt I基因进行扩增，并对扩增产物进行测序和生物信息学分析，进一步去掉信号肽并构建重组表达质粒pET－28a－MdDpt I，转化大肠杆菌BL21（ DE3），IPTG诱导表达，对表达产物进行SDS－PAGE电泳分析。借助亲和纯化获得目的蛋白，并验证目的蛋白的生物活性。 MdDpt I基因全长为419 bp，包含一个300 bp的完整开放阅读框（ ORF），编码99个氨基酸，其cDNA序列与GenBank 中登录号为FJ794602．1的家蝇双翅肽基因同源性为95％。构建了家蝇MdDpt I基因的成熟肽原核表达质粒pET－28a－MdDpt－I，并获得成功表达，表达产物约为12 ku，与预期结果一致。纯化后的目的蛋白表现出一定的抑菌活性。本试验获得了MdDpt I基因的全长序列，构建了原核表达载体，并成功获得表达纯化。