高致病性H7N9流感病毒RT?LAMP检测方法的建立

2017年2月广东CDC首次报告了一种新的H7N9流感病毒变异株,该变异株在血凝素(HA)基因的裂解位点发生了插入型突变,从而成为对禽高致病性的H7N9流感病毒(HP?H7N9).因此,急需建立一种快速简便的H7N9流感病毒检测方法.根据HP?H7N9的HA基因序列,设计一组HP?H7N9特异性的RT?LAMP引物,在对反应体系进行优化的基础上,建立了HP?H7N9的RT?LAMP检测方法并进行了特异性试验、敏感性试验.结果显示,本方法只对HP?H7N9特异性扩增,而对低致病性H7N9病毒(LP?H7N9)、H7N3流感病毒(H7N3)、H3N2流感病毒(H3N2)、H5N1禽流感病毒(H5N1)、H9亚型禽流感病毒(H9)、新城疫病毒(NDV)、甲型H1N1流感病毒(H1N1)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)等病原未见扩增.该方法最低能够检测到2.97×105 copies(10-6稀释度)的阳性质粒,具有良好的检测灵敏度.本方法操作简便,对设备需求较低,试验耗时短,反应结果可直接肉眼观察判读,适用于基层兽医站所、养殖场及野外监测点的HP?H7N9的快速筛查和监测.