五种基于CHD基因的性别鉴定方法对雀形目鸟类有效性的实验评估

性别鉴定是鸟类研究和保护中的一项基础工作.对于单态型鸟类,通过外观判定性别比较困难.已有的一些方法,如体尺测量、 鸣声判定、 翻肛鉴别、 腹腔镜检、 类固醇水平测定和核型分析等,要么可靠性不高,要么操作过程繁琐,要么对鸟体带来伤害.染色体螺旋蛋白结合基因(CHD)在Z和W染色体上内含子的大小存在差异,设计PCR引物来同时扩增Z、W染色体上的内含子片段,有差异者便可判定为雌性,无差异者判定为雄性.目前,常用的引物有5对,分别是P2/P8、2550F/2718R、CHD1F/CHD1R、sex1'/sex-mix和IntP2/IntP8,在24个科中均有尝试,但结果千差万别,实际工作常被误导.本研究以树鹨(Anthus hodgsoni,n=20)、 棕眉山岩鹨(Prunella montanella,n=35)、黄眉柳莺(Phylloscopus inornatus,n=76)、 黄腰柳莺(Ph&.proregulus,n=36)、 褐柳莺(Ph.fuscatus,n=20)和灰脚柳莺(Ph.tenellipes,n=27)等6种雌雄同型的雀形目鸟类为材料,从鉴定正确率、PCR体系灵敏度和扩增成功率3个方面对这5对引物的有效性进行了评估.结果表明,引物对sex1'/sex-mix的鉴定正确率为95％,PCR体系灵敏度为10 pg/μL模板浓度,PCR扩增成功率为97％,是性别鉴定的最优选择;引物IntP2/IntP8的正确率达到95％,体系灵敏度为100 pg/μL,但扩增成功率仅为63％,应慎用;2550F/2718R的体系灵敏度为100 pg/μL,扩增成功率仅为85％,但正确率为80％,更应慎用;引物P2/P8的正确率为80％,体系灵敏度为500 pg/μL,但扩增成功率仅为58％,不建议使用;引物CHD1F/CHD1R体系灵敏度为100 pg/μL,但正确率和扩增成功率分别为65％和56％,亦不建议使用.