羊源多杀性巴氏杆菌ExbD基因克隆、原核表达及生物信息学分析

旨在克隆和表达羊源多杀性巴氏杆菌的ExbD基因,并对其编码蛋白进行生物信息学分析.试验通过PCR成功扩增出目的基因片段,将所回收片段与pET-28a(+)载体进行连接,构建pET-28a(+)-ExbD重组质粒,将所得pET-28a(+)-ExbD重组质粒经双酶切鉴定后转至大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞,通过自诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.结果 显示:扩增出390 bp的目的基因,诱导表达得到约为19 ku的重组蛋白.经生物信息学分析,该蛋白为疏水性酸性蛋白,属于稳定蛋白,分子式为C656H1068N160O193S3,分子质量约为14.44ku,消光系数(L·mol-1·cm-1=280 nm)为6 990,理论等电点是5.16,不稳定系数为35.28 (＜40),总平均疏水性(GRAVY)为0.145,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主.本试验通过对ExbD基因的克隆、表达和分析,为进一步探究该基因的功能提供了基础和参考依据.