犬DEA1.1血型抗体间接Dot-ELISA检测方法建立

为了建立一个更为简单和敏感的方法,以作为不使用试剂红细胞检测犬DEA1.1血型抗体的替代方法,从犬DEA1.1阳性红细胞中分离出细胞膜.将携带DEA1.1阳性抗原的膜置于硝酸纤维素膜上,加入初级抗体和辣根过氧化物酶标记的二级抗体,采用TMB显色试剂盒检测.对照试验采用凝聚胺抗球蛋白试验检测DEA1.1抗体.用DEA1.1阳性和阴性血型抗原检测Dot-ELISA的灵敏度、稳定性和特异性.用158只犬的血清样本检测Dot-ELISA的准确性.结果 显示,Dot-ELISA方法比凝聚胺抗球蛋白试验灵敏8倍以上.即使细胞膜反复冻融20次,其抗原稳定性也不受影响,并且可在-20℃时长期稳定保存.在对158只犬血清检测的过程中,该方法展现了与凝聚胺抗球蛋白试验较高的相关性.表明本研究成功建立了犬DEA1.1血型抗体Dot-ELISA检测方法,并且方法稳定、灵敏、无需试剂红细胞,可以作为输血前传统抗体检测的一种有效替代方法.