犬表皮生长因子受体2胞外Ⅳ区(her-2-ECD-4)抗原表位分析及单克隆抗体制备

为了制备犬her-2-ECD-4单克隆抗体并验证其识别的抗原序列,本研究利用TMHMM server2.0、SWISS-MODLE、ProtParam及Sopma等分析软件,对该区域蛋白序列进行了理化性质分析、一级结构分析、二级结构分析以及三级结构建模.综合以上各数据得出犬her-2-ECD-4可能的抗原表位为ecq(56-58)、ykd(80-82)、fade(106-109)、aeqras (134-139),在此基础上针对该区域制备了单克隆抗体,获得了3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为3-1B10、4-1B2、6-1C7,通过对杂交瘤细胞株的鉴定发现,3-1B10和4-1B2识别同一段抗原多肽,其中包括预测出的抗原表位ykd(80-82),它们的亚类鉴定结果也相同,均为IgG1.6-1C7识别的抗原多肽含有ecq(56-58)这个预测表位,其亚类鉴定结果为IgM.另外,通过Western Blot分析,发现本实验制备的单克隆抗体与犬乳腺肿瘤细胞系CHmm中提取的蛋白具有良好的反应性.本研究为下一步开展犬乳腺肿瘤的肿瘤标志物筛查诊断试剂盒研制及靶向治疗提供了基础.