禽呼肠孤病毒(ARV)p10蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为了深入研究禽呼肠孤病毒(ARV)的致病机理,从其基因组中克隆病毒非结构蛋白p10基因,并将其与原核表达载体连接,转入大肠杆菌BL21中,使其表达携带His标签的p10融合蛋白,经镍柱纯化得到高纯度重组p10蛋白,以该蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,经过3次亚克隆后获得2株能够稳定分泌针对p10蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为2B12与4H10.通过间接ELISA(Enzyme-linked immunosorbentassay)方法测定其腹水效价均为1∶1.01×107,亲合力解离常数(kD)分别为3.91×10-10、5.75×10-10,2株单抗的IgG亚型均为IgG2b.经Western Blot鉴定,该2株抗体均能特异性识别ARV感染DF-1细胞中的p10蛋白.这些单抗的制备为深入研究ARV的致病机理奠定了基础.