鹅颗粒细胞转录因子GATA结合蛋白4（GATA4）真核表达质粒的构建

【目的】本研究旨在构建鹅颗粒细胞转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1/GATA4，为研究GATA4在鹅颗粒细胞中功能作用奠定实验基础。【方法】原代培养鹅颗粒细胞，取细胞总RNA，RT-PCR扩增出GATA4 cDNA基因片段，克隆连接至载体PMD19-T，用限制性内切酶EcoRI及BanHI酶切，鉴定克隆产物为所需的目的基因片段后，胶回收目的基因，并进行序列测定，然后将上述胶回收产物与载体pEGFP-N1连接，导入感受态DH5α，菌液涂于含卡那霉素琼脂糖平板上，挑取抗性单菌落，进行质粒DNA扩增，酶切及测序鉴定，证实均为阳性克隆，即GATA4与pEGFP-N1体外重组成功。【结论】采用体外重组技术，成功将鹅GATA4 cDNA插入荧光蛋白表达载体pEGFP-N1中。