慢病毒介导沉默CDH1基因的MDCK细胞株建立中最佳的MOI值及嘌呤霉素浓度的筛选

目的:筛选出慢病毒介导沉默CDH1基因的MDCK细胞株建立中最佳的感染复数(Multiplicity of infection,MOI)及嘌呤霉素浓度(Puromycin).方法:CDH1干扰阴性对照慢病毒以MOI值0、1、10、100(TU number/cell)分别侵染MDCK细胞,72 h后病毒感染效率达80％以上且细胞形态良好的对应MOI值为最佳MOI值.MDCK细胞中分别加入0～11μg/ml Puromycin,每1μg/ml设置一个浓度梯度,选择第4天细胞全部死亡的最低浓度为Puromycin的最佳浓度.结果:MOI值为100时,细胞荧光率为80％～90％,细胞形态良好,100确定为最佳MOI值.Puromycin浓度为7μg/ml,四天后MDCK细胞全部死亡,确定为最佳浓度.结论:确定了慢病毒介导沉默CDH1基因的MDCK细胞株建立中最佳的MOI值及嘌呤霉素浓度,为后续慢病毒介导沉默CDH1基因的MDCK细胞株的建立打下了重要基础.