实时荧光定量PCR构建牛源粪肠球菌esp标准曲线
Chinese Journal of Traditional Veterinary Science（2019）
Abstract
为了快速检测牛源粪肠球菌,本实验建立了粪肠球菌esp基因实时荧光定量PCR标准曲线.首先参照esp基因在Genbank中的序列进行引物的设计与合成,利用PCR扩增目的基因并将其连接到pMD 18-T载体上,并转化进入大肠埃希菌TOP10感受态细胞,经测序鉴定成功后,提取重组质粒并以10倍系列稀释后作为标准模板,进行实时荧光定量PCR.成功建立了牛源粪肠球菌esp基因荧光定量PCR标准曲线及其直线回归方程,所得熔解曲线峰值单一,表明引物具有很好的特异性;标准曲线相关系数r2=0.9998,说明线性关系良好,目的基因的荧光定量PCR的标准曲线构建成功.本研究为快速检测牛源粪肠球菌奠定了基础.
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