小反刍兽疫病毒间接化学发光抗体检测方法的建立与优化

构建了原核表达质粒pET-28a-N,经原核表达纯化获得小反刍兽疫病毒N蛋白.将纯化的小反刍兽疫病毒N蛋白与对应的酶标二抗配对,通过对各个反应条件的优化建立了间接化学发光抗体检测方法.通过对血清样本的检测,对该方法的敏感性、特异性、重复性、符合率进行了评价.试验结果显示:N蛋白最适包被浓度为0.5 μg/mL,最适包被条件为4℃24 h;酶标二抗最适工作浓度为1∶2000.特异性试验证明,该方法与羊常见病毒的抗体阳性血清没有交叉反应.通过检测大量小反刍兽疫病毒抗体阴、阳型血清,确定了科学的判定标准.