基于卵黄抗体的副溶血弧菌间接ELISA快速检测方法的建立

本文主要研究了以水产致病性哈氏弧菌为抗原，免疫SPF蛋鸡，制备特异性卵黄抗体，从抗体的提取、纯化等方面进行了进一步的优化研究；建立基于IgY的快速、准确、定量的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗原菌浓度的技术；建立基于IgY的间接ELISA测定抗原浓度的技术方法，确定抗原包被浓度、一抗IgY和酶标二抗最适稀释倍数，抗原包被条件的选择，底物的最佳反应时间等间接ELISA的实验条件。建立了基于IgY的间接ELISA测定哈氏弧菌的方法，试验的最佳反应条件为：抗原最适工作浓度浓度为1×108cfu/ml，包被4℃过夜；一抗IgY稀释度分别为1：28；购买的兔抗鸡IgY-HRP酶标抗体作1：20000稀释；选择底物的最佳反应时间为20min。