表达PCV-2Cap和PPV-1VP2蛋白的重组PRV的构建及鉴定

为了构建表达猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白和猪细小病毒1型(PPV-1)VP2蛋白的重组伪狂犬病病-毒(PRV)及鉴定其免疫原性,试验采用经典同源重组技术构建重组病毒,利用密码子优化的VP2基因(VP2opli)和含PRV gG蛋白信号肽序列的VP2opti基因分别构建重组质粒pMD18T-LR(TK)-VP2opti和pMD 18T-LR(TK)-VP2opti(SP).用已构建的重组病毒rPRV-TK-/gE-/gG-/3Cap+为骨架,以EGFP为标签经同源重组获得重组病毒.采用IPMA法鉴定Cap蛋白和VP2蛋白抗原在重组病毒感染的PK-15细胞中的表达,采用IFA法鉴定VP2蛋白在重组病毒感染的PK-15细胞中的表达与定位.用这2株重组病毒免疫小鼠,通过检测血清中PRV、PCV-2和PPV-1抗体水平对构建的重组病毒在小鼠体内的免疫原性进行评价.结果表明:经同源重组获得重组病毒rPRV-TK-/VP2+/gE-/gG-/2Cap+和rPRV-TK-/VP2+(SP)/gE-/gG-/2Cap+;在重组病毒感染的PK-15细胞中均能检测到阳性Cap蛋白和VP2蛋白抗原;重组病毒rPRV-TK-/VP2 +/gE-/gG-/2Cap+表达的VP2蛋白定位于细胞浆和细胞核,而重组病毒rPRV-TK-/VP2+(SP)/gE-/gG-/2Cap+表达的VP2蛋白定位于细胞浆;用这2株重组病毒免疫小鼠能够检测到PRV中和抗体;用灭活的重组病毒免疫小鼠后可产生低水平的Cap和VP2抗体,而重组病毒活毒免疫的小鼠未检测到相应抗体.说明这2株重组病毒在体外能够表达Cap蛋白和VP2蛋白,PRV gG蛋白信号肽序列的加入促进了VP2蛋白从细胞核的释放.