A型口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备鉴定

为了深入了解VP1蛋白的结构和功能,并建立A型口蹄疫(FMD)血清抗体检测方法,试验采用纯化的重组蛋白pET-32a-VP1免疫Balb/c小鼠,以纯化的重组蛋白pGEX-6p-1-VP1作为检测抗原包被酶标板检测抗体效价.将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,其杂交瘤细胞用间接ELISA法进行筛选,获得4株能稳定分泌抗口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1的特异性杂交瘤细胞株,分别命名为1D10、3D12、4E12和5G7.结果表明:这4株单克隆抗体均为IgM亚型和K轻链,单克隆抗体间可能识别同一个表位,或表位重叠性大.4株单克隆抗体均能被A型FMDV阳性血清所阻断,具有特异性,且以单克隆抗体4E12产生的抗体效价最高、稳定性强、亲和力最大,并能与重组蛋白FMDV-A-VP1特异性结合.说明单克隆抗体4E12可作为单克隆抗体竞争ELISA法的竞争抗体用于检测A型FMDV血清抗体.