耐甲氧西林伪中间型葡萄球菌的分离鉴定及其生物被膜形成能力的检测

为了对从临床患病犬皮肤采集的样品进行分离菌鉴定,并了解犬源伪中间型葡萄球菌(Ctaphylococcus pseudintermedius)的生物被膜形成能力,试验对采集的临床患犬的皮肤样品通过染色镜检、触酶试验、血浆凝固酶试验、耐热核酸酶试验进行鉴定,并对分离菌进行药敏试验,对 16S rRNA基因、凝固酶(Coagulase)基因、MecA基因及生物被膜主要基因(ica、sarA)进行 PCR扩增,同时对 Co-agulase、MecA基因的 PCR扩增产物测序并进行 BLAST比对分析.结晶紫染色定量法检测分离菌的生物被膜形成能力,扫描电镜(SEM)观察生物被膜的形态结构.结果表明:染色镜检、触酶试验、血浆凝固酶试验初步确定分离菌为葡萄球菌,耐热核酸酶试验初步确定为伪中间型葡萄球菌.分离菌对红霉素、头抱哝嗣、娘拉西林等抗菌药物表现为中介或耐药,对多西环素、四环素、米诺环素等敏感.16S rRNA基因、Coagulase基因、MecA基因及生物被膜主要基因(ica,sarA)PCR扩增结果均为阳性,16S rRNA基因、MecA基因扩增产物测序结果表明,分离菌为耐甲氧西林伪中间型葡萄球菌.结晶紫染色定量法检测结果表明,该分离菌可形成中等都附.电镜检测可见菌体呈球形,菌体聚集成簇,细菌间有崭液样物质,且菌体表面被大量丝状和性物质包裹,即菌体分泌的大量胞外物质.说明本试验分离得到耐甲氧西林伪中间型葡萄球菌,该分离菌具有生物被膜形成能力.